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选购全波长多功能酶标仪时,一定要考虑滤光系统和测定波长

点击次数:1213    发布时间:2018-10-23

 滤光系统
 
    全波长多功能酶标仪简单的是用滤光方式来划分。一般来说,可以分为滤光片型和光栅型两大类。也有一些全波长多功能酶标仪里面同时装上了滤光片和光栅。但是滤片和光栅并不能同时完成同一个检测,本质上还只是把滤片和光栅放在了一起,并没有使两者糅合而产生新的技术突破。
    光栅型滤光系统具有使用方便,可以进行光谱扫描,灵活性等优点。当然,滤光片系统也有其显著的优势,例如价格较为便宜,检测灵敏度高,带宽的可选择性,可以进行快速的滤光片切换,可配备有自动加样系统,在化学发光检测中光线的透过率高。
    目前,滤光片系统应用更广,因为它可以让实验者完成更多的试验。
 
测定波长
 
    一般全波长多功能酶标仪的测定波长在400~750nm或800nm之间,*可以满足ELISA的显色测定。目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根过氧化物酶(HRP),底物通常为四甲基联苯胺(TMB)和邻苯二胺(OPD),其在过氧化氢溶液的存在下,经HRP作用,分别氧化为2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和联苯醌。当pH值为5.0左右时,DAB在450nm波长处有大吸收,当pH值降为L 0时,大吸收波长移至492 nm,同时摩尔消光系数变大,显色加深,因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。TMB的氧化产物联苯醌在波长450nm处有大消光系数,如果HRP量少,H:O:和TMB过量时,则形成蓝色的阳离子根。降低pH,即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌,使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min。因此,450nm和492 nm两个波长是目前ELISA测定常用的。各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件,可以同时安装6~8片滤光片,所配备的滤光片均应包括上述两个波长,有的酶标仪以490nm滤光片替代492nm滤光片,影响不大。除了这两个基本滤光片外,考虑到双波长比色的需要,还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片,其他滤光片可根据自己的需要选择。有时,有的实验室希望用酶标仪作微量生化测定,故全波长多功能酶标仪生产厂家对其生产的酶标仪扩展了紫外检测功能,此时需要一个340 nm波长滤光片。此时,酶标仪的测定波长范围就成为340—750nm或800nm。
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